| 诊断试剂用己糖激酶的制备工艺研究 |
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| 引用本文： | 刘春卯,罗同阳,胡美荣,吴芳彤,曹倩荣,郑翔. 诊断试剂用己糖激酶的制备工艺研究[J]. 河北农业大学学报, 2017, 40(1). DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2017.0012 |
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| 作者姓名： | 刘春卯 罗同阳 胡美荣 吴芳彤 曹倩荣 郑翔 |
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| 作者单位： | 1. 河北省微生物研究所酶工程室,河北保定,071051;2. 河北省微生物研究所检测中心,河北保定,071051;3. 中国科学院微生物研究所微生物生理与代谢工程重点实验室,北京,100010 |
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| 基金项目： | 河北省科学院科技计划项目 |
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| 摘 要： | ![]()
为获得微生物工程菌株来源的己糖激酶(Hexokinase,HK)并提高HK的发酵水平,对已构建产HK的大肠工程菌株BW25113-pYBE/schk进行发酵工艺优化,为HK法血糖检测试剂盒的配制提供技术支撑。本研究采用正交试验对菌株发酵工艺进行优化,并对超声破壁获取粗酶及粗酶的纯化工艺进行研究。结果表明:工程菌株BW25113-pYBE/schk的最佳发酵培养条件为:装液量80mL/500mL,发酵液初始pH 6.5,发酵温度37℃,接种量2%,诱导剂添加时间为接种后1h,转速180r/min。超声破壁最佳工艺为:功率200 W,工作1.5s间歇1s,破壁5min。在最佳发酵和破壁工艺条件下,HK的发酵活力稳定在157U/mL,经过Ni-Agarose His标签蛋白试剂纯化获得60kD的HK。本研究建立了高产己糖激酶大肠杆菌工程菌株的发酵工艺,有利于降低己糖激酶法血糖试剂盒的成本,为糖尿病患者的准确诊断及普及提供便利条件。
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| 关 键 词： | 己糖激酶HK 大肠杆菌 诊断试剂 正交试验 |
Preparation of hexokinase for diagnostic reagents |
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| LIU Chun-mao,LUO Tong-yang,HU Mei-rong,WU Fang-tong,CAO Qian-rong,ZHENG Xiang. Preparation of hexokinase for diagnostic reagents[J]. Journal of Agricultural University of Hebei, 2017, 40(1). DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2017.0012 |
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| Authors: | LIU Chun-mao LUO Tong-yang HU Mei-rong WU Fang-tong CAO Qian-rong ZHENG Xiang |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | hexokinase Escherichia coli diagnostic reagents orthogonal design |
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