| 大肠杆菌(O157)酶联免疫检测及注意事项 |
| |
| 引用本文： | 黄海燕,陈亮,马艳梅.大肠杆菌(O157)酶联免疫检测及注意事项[J].养殖技术顾问,2012(12):117. |
| |
| 作者姓名： | 黄海燕 陈亮 马艳梅 |
| |
| 作者单位： | 1. 吉林农业工程职业技术学院 136001
2. 黑龙江职业学院 150111 |
| |
| 摘 要： | 1材料与方法
1.1材料
抗原为Eae-Stx1/2B纯化蛋白;EHEC O157标准菌株(EDL933).抗体为单抗2H9纯化腹水,蛋白浓度为4.16毫克/毫升.
1.2方法
EHEC O157检测方法的建立.抗原包被浓度和抗体工作浓度的初步选择,用PBS调整Eae-Stx1/2B纯化蛋白浓度为8、4、3、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06微克/毫升,纵向包被1小时,封闭,洗涤,单抗从1:1000开始进行倍比稀释,横向加入各孔内,37℃反应1小时,加酶标二抗,洗涤,加底物液显色后终止,测定OD值.以OD值接近1.0,且前后稀释度出现较大变化时,该孔的包被浓度初步确定为最佳包被浓度,该孔抗体的稀释倍数为单抗的初步工作浓度.抗原的最佳包被温度和包被时间的确定.取5块酶标板,用初步确定的Eae-Stx 1/2B纯化蛋白的最佳包被浓度包被酶标板,分别于37℃0.5小时、37℃1小时、37℃2小时、37℃3小时、37℃4小时温育和4℃过夜;以初步确定的单抗工作浓度进行间接ELISA检测,测定其OD值.OD值最大最稳定的为最佳包被温度和时间.
|
| 关 键 词： | 注意事项 纯化蛋白 检测方法 蛋白浓度 材料与方法 包被 标准菌株 敏感性测定 标准曲线 酶标板 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
