秦川牛PLIN2基因参与脂滴形成调节机制的研究

【目的】研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。【方法】以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料，采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC，超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-PLIN2及对照pcDNA3.1(+)-empty vector（pcDNA3.1(+)-EV），转染秦川牛脂肪细胞并进行相关基因mRNA及蛋白水平表达量验证，并对转录因子C/EBPα是否能结合在PLIN2基因启动子区域进行验证。【结果】si-PLIN2处理组中CREB基因表达量无明显变化，C/EBPβ和C/EBPα基因mRNA水平表达量与si-NC对照组相比分别出现显著或极显著下调。与对照组pcDNA3.1(+)-EV相比，过表达组pcDNA3.1(+)-PLIN2CREB相对表达量极显著上调，C/EBPα和C/EBPβ基因相对表达量上调，但差异不显著。Western blot蛋白表达水平检测发现，si-PLIN2中磷酸化水平CREB(phospho-CREB,p-CREB)、C/EBPβ、C/EBPα的表达量显著低于对照组si-NC，过表达组上述转录因子表达量未出现明显上调。ChIP试验结果表明，转录因子C/EBPα可以结合在PLIN2基因启动子区域，并调控秦川牛PLIN2基因的表达。【结论】下调秦川牛PLIN2基因可反馈抑制上游cAMP-PKA信号通路p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα 3个转录因子的表达，从而抑制秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴生成。

The function of PLIN2 in regulating lipid droplets formation of Qinchuan cattle