铁皮石斛中性/碱性转化酶家族基因的克隆和表达分析

为了探究铁皮石斛中性/碱性转化酶(neutral/alkaline invertase, NI)家族基因的生物学特性和组织表达特性，本试验从铁皮石斛转录数据库中筛选DoNI基因，采用PCR技术克隆到4个新的铁皮石斛DoNI家族基因，分别命名为DoNI1、DoNI3、DoNI4和DoNI5，并利用生物信息学软件分析家族蛋白的理化特性，采用荧光定量PCR检测和分析该家族基因的时空表达特性。结果显示：DoNI1、DoNI3、DoNI4和DoNI5分别编码611、651、554和555 aa，其蛋白分子量为63.18～73.23 kD，等电点为5.84～6.66，氨基酸序列同源性为50%～90%。具有中性转化酶的保守结构域，属于糖基水解酶GH100家族。DoNI1属于线粒体型，DoNI3属于叶绿体型，DoNI4和DoNI5属于细胞质型。在铁皮石斛花、茎、叶和根中都能检测到DoNI家族基因的表达，DoNI1和DoNI3在根中基因表达量最高，DoNI4和DoNI5在花中基因表达量最高。DoNI1在2年生茎中基因表达量最高，1年生茎中次之，3年生茎中最低。不同生长年限茎中的DoNI3与DoNI1基因...