生长激素受体激活剂的制备及鉴定 |
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引用本文: | 李雨萌,洪 盼,兰海楠,等.生长激素受体激活剂的制备及鉴定[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2016,44(5):13-19. |
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作者姓名: | 李雨萌 洪 盼 兰海楠 等 |
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作者单位: | 吉林农业大学 动物科技学院,吉林农业大学 动物科技学院,吉林农业大学 动物科技学院 |
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基金项目: | 吉林省教育厅应用基础项目“猪生长激素模拟肽与生长激素受体结合特异性的研究”(吉教科合字[2012]第39号);“十二五”农村领域国家科技计划项目(2013BAD10B00) |
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摘 要: | 【目的】制备生长激素受体的单克隆抗体,探讨其对生长激素受体的激活作用,为研究生长激素模拟物提供新思路。【方法】以生长激素受体胞外域(GHBP)免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤技术制备抗生长激素受体的单克隆抗体,用流式技术筛选抗体,通过流式、激光共聚焦显微镜观察研究该单克隆抗体对生长激素受体的激活作用,然后通过Western-blot等技术手段研究其胞内的信号通路。【结果】通过杂交瘤技术共获得了30个分泌抗生长激素受体的单克隆抗体,经流式分析筛选到具有受体激动剂活性的单克隆抗体(命名为L8)。竞争性结合分析结果表明,L8在受体上的结合表位与生长激素重叠;激光共聚焦观察结果表明,L8不但能结合到细胞表面的生长激素受体,而且还能内化进入胞体。经Western-blot和流式分析表明,L8能与转染GHR基因的CHO-GHR638细胞表面的生长激素受体结合,并启动JAK2-STAT5、ERK1/2信号转导通路,且呈现出剂量依赖性。【结论】生长激素受体抗体可以作为受体的激动剂,其可能是通过诱导受体构象变化的方式激活受体,并启动JAK2-STAT5等信号转导通路。
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关 键 词: | 生长激素 抗生长激素受体抗体 信号转导通路 |
收稿时间: | 2014/9/19 0:00:00 |
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