| H9N2亚型禽流感病毒河南株NP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 |
| |
| 引用本文： | 陈红英,方忠意,崔保安. H9N2亚型禽流感病毒河南株NP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2009, 37(10): 19-24 |
| |
| 作者姓名： | 陈红英 方忠意 崔保安 |
| |
| 作者单位： | 陈红英,崔保安,李新生,夏平安,金钺(河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州450002);方忠意(河南省兽药监察所,河南,郑州450002) |
| |
| 基金项目： | 国家"十一五"科技支撑计划专项 |
| |
| 摘 要： | 【目的】克隆H9N2亚型禽流感病毒(AIV)河南株核蛋白(NP)基因,并将NP主要抗原表位区在大肠杆菌中进行表达,为禽流感基因工程诊断抗原的制备和开发奠定基础。【方法】根据GenBank公布的禽流感病毒NP基因序列设计引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从H9N2亚型AIV河南株感染的鸡胚尿囊液RNA中扩增AIV河南株NP全基因,将扩增的PCR产物克隆到pGEM-T easy载体并进行测序。通过PCR和酶切方法将NP主要抗原表位区亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达重组蛋白。【结果】测序结果表明,克隆的H9N2亚型AIV河南株NP基因全长为1497bp,包含1个完整读码框,编码498个氨基酸,与GenBank中不同来源、不同亚型的其他7株禽流感病毒NP基因的核苷酸同源性达到95%以上,氨基酸同源性达到98%以上。SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为42 ku的重组蛋白。经1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时,重组蛋白的表达量最高。Western blot分析表明,重组蛋白能够与H9亚型AIV阳性血清发生特异反应。【结论】NP基因非常保守,建立的表达系统能够表达NP蛋白且表达蛋白具有良好的免疫原性。
|
| 关 键 词： | 禽流感病毒 河南株 核蛋白 克隆 表达 |
| 收稿时间： | 2009-02-11 |
Cloning and expression of NP gene of H9N2 subtype avian influenza virus henan isolate in Escherichia coli |
| |
| CHEN Hong-ying,FANG Zhong-yi,CUI Bao-an,LI Xin-sheng,XIA Ping-an,JIN Yue. Cloning and expression of NP gene of H9N2 subtype avian influenza virus henan isolate in Escherichia coli[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2009, 37(10): 19-24 |
| |
| Authors: | CHEN Hong-ying FANG Zhong-yi CUI Bao-an LI Xin-sheng XIA Ping-an JIN Yue |
| |
| Affiliation: | 1(1 College of Animal Husbandry and Veterinary,Henan Agricultural University,Zhengzhou,Henan 450002,China;2 Henan Institute of Veterinary Drug Control,Zhengzhou,Henan 450002,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | avian influenza virus henna isolate nucleoprotein cloning expression |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(自然科学版)》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《西北农林科技大学学报(自然科学版)》下载全文 |
|
