| 鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株TA4基因的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 高翔,杜爱芳,张娟敏,侯玉慧,庞林海.鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株TA4基因的克隆及原核表达[J].中国预防兽医学报,2008,30(5):366-370. |
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| 作者姓名： | 高翔 杜爱芳 张娟敏 侯玉慧 庞林海 |
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| 作者单位： | 1. 浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州,310029
2. 嘉兴市畜牧兽医站,浙江嘉兴,314000 |
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| 基金项目： | 浙江省嘉兴市科技局资助项目
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浙江银冠兽药饲料有限公司资助项目 |
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| 摘 要： | 本试验对E．tenella ZJ株的TA4基因进行了克隆和表达。根据已报道的柔嫩艾美尔球虫TA4基因序列设计引物，以孢子化卵囊总RNA为模板，用RT—PCR的方法扩增得到一特异片段，将扩增产物克隆至pMD18-T，转化DH5-α感受态，经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列比较，核苷酸同源性为99．1％。然后将重组质粒和表达载体pGEX-4T2分别以EcoR I、Xho I酶切后构建重组表达载体pGEX—TA4，并将其转化入大肠杆菌BL21中，提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后，用IPTG诱导表达。表达产物经SDS—PAGE和Western blot检测显示，TA4基因在大肠杆菌中获得表达；融合蛋白的分子量约为43ku，以包涵体形式存在；诱导6h的蛋白表达量可达到35.9％，采用抗GST抗体进行Western blot，成功检测到了该特异性条带。
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| 关 键 词： | 柔嫩艾美尔球虫 TA4基因 RT-PCR 原核表达 鸡柔嫩艾美耳球虫 基因 克隆 原核表达 strain tenella Eimeria gene expression 特异性条带 检测显示 抗体 蛋白表达量 存在 包涵体 分子量 融合蛋白 大肠杆茵 Western blot |
| 文章编号： | 1008-0589(2008)05-0366-05 |
| 修稿时间： | 2005年11月1日 |
Cloning and expression of TA4 gene of Eimeria tenella ZJ strain |
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| GAO Xiang,DU Ai-fang,ZHANG Juan-min,HOU Yu-hui,PANG Ling-ha.Cloning and expression of TA4 gene of Eimeria tenella ZJ strain[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2008,30(5):366-370. |
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| Authors: | GAO Xiang DU Ai-fang ZHANG Juan-min HOU Yu-hui PANG Ling-ha |
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