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杏ISSR反应体系的优化和指纹图谱的构建
引用本文:刘威生,冯晨静,杨建民,刘冬成,张爱民,李绍华.杏ISSR反应体系的优化和指纹图谱的构建[J].果树学报,2005,22(6):626-629.
作者姓名:刘威生  冯晨静  杨建民  刘冬成  张爱民  李绍华
作者单位:1. 中国农业大学农学与生物技术学院,北京,100094;辽宁省果树科学研究所,辽宁,熊岳,115009
2. 河北农业大学,河北,保定,071001
3. 中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京,100101
4. 中国科学院植物研究所,北京,100093
摘    要:以杏品种清密沙为试材,用引物UBC825〔序列为(AC)8T〕研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对杏ISSR扩增结果的影响。结果表明:Primer、Mg2+、Taq酶浓度对扩增效果有明显影响,而模板DNA和dNTPs含量对扩增结果影响不大。优化的反应体系为:20μL的反应体系中含10ng模板DNA、0.1mmol/LdNTP、0.25μmol/LPrimer、2.5mmol/LMg2+,0.5UTaqPolymerase。适宜退火温度为50-52.1℃。用引物UBC825和UBC868〔序列为(GAA)5〕在优化的反应条件下建立了5个种12份杏材料的ISSR指纹图谱。

关 键 词:  ISSR(inter-simple  sequence  repeat)  反应体系  退火温度  优化
文章编号:1009-9980(2005)06-626-04
修稿时间:2005年5月20日

Optimization of ISSR reaction system and construction of cultivar fingerprint in apricot
LIU Wei-sheng,FENG Chen-jing,YANG Jian-min,LIU Dong-cheng,ZHANG Ai-min,LI Shao-hua.Optimization of ISSR reaction system and construction of cultivar fingerprint in apricot[J].Journal of Fruit Science,2005,22(6):626-629.
Authors:LIU Wei-sheng  FENG Chen-jing  YANG Jian-min  LIU Dong-cheng  ZHANG Ai-min  LI Shao-hua
Institution:LIU Wei-sheng1,2,FENG Chen-jing3,YANG Jian-min3,LIU Dong-cheng4,ZHANG Ai-min4,LI Shaohua5*
Abstract:The effects of the concentrations of PCR reaction components on inter-simple sequence repeat (ISSR) amplification results of apricot cv. Qingmisha were studied with the primer UBC825〔primer sequence: (AC)8T〕. The results showed that optimal concentrations of PCR-ISSR reaction system was 10 ng template DNA,2.5 mmol/L Mg2+,0.25 μmol/L Primer, 0.1 mmol/L dNTPs and 0.5 U Taq Polymerase per 20 μL reaction volume and the optimal annealing temperature was between 50℃ and 52.1℃. The ISSR fingerprinting profiles of 12 accessions covering five species of apricot were established with primer UBC825〔(AC)8T〕and primer UBC868〔(GAA)5〕.
Keywords:Apricot  ISSR(inter-simple sequence repeat)  Reaction system  Annealing temperature  Optimization
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