荷花ISSR引物筛选及反应体系优化 |
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引用本文: | 徐君,李静会,李欣,姜红卫.荷花ISSR引物筛选及反应体系优化[J].江苏农业科学,2014(10). |
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作者姓名: | 徐君 李静会 李欣 姜红卫 |
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作者单位: | 江苏太湖地区农业科学研究所,江苏苏州,215155 |
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基金项目: | 江苏省农业科技自主创新资金[ |
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摘 要: | 利用加拿大哥伦比亚大学(UBC)公布的100条ISSR引物,以2个荷花品种的DNA为模板进行PCR扩增。采用单因素试验方法对荷花ISSR-PCR反应体系的5个因素(Mg2+、引物、dNTP、模板DNA、Taq酶)进行浓度优化,确定了荷花ISSR反应的25μL最佳扩增体系为:10×Taq Buffer 2.5μL,Mg2+3.0 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,引物1.0μmol/L,Taq酶1.00 U,模板DNA 40 ng。筛选出8条扩增条带较好的ISSR引物,并对其引物进行梯度PCR试验,筛选出各引物对应的最佳退火温度,扩增共计获得61条ISSR条带。
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关 键 词: | 荷花 ISSR 引物筛选 体系优化 |
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