| 二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 张道伟,陈静,张正玲,曾燕玲,郭玉双.二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备[J].东北农业大学学报,2015(1):62-67. |
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| 作者姓名： | 张道伟 陈静 张正玲 曾燕玲 郭玉双 |
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| 作者单位： | 遵义师范学院生命科学学院/赤水河流域动物资源保护与应用研究重点实验室;遵义医学院生化与分子生物学教研室;贵州省烟草科学研究院 |
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| 基金项目： | 贵州省科技厅项目(黔科合J字[2013]2307号);遵义师范学院博士基金(BSJJ201206) |
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| 摘 要： | 以制备的二斑叶螨c DNA为模板,克隆二斑叶螨几丁质酶Se Chi基因功能结构域催化区片段,大小为786 bp。将该序列片段克隆到表达载体p ET-32a(+)中,获得多克隆原核表达载体p ET-32a-Tu Chi。重组质粒经酶切测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),经0.6 mmol·L-1IPTG诱导4 h后高效表达约45 ku可溶性重组蛋白;经His亲和层析洗脱和浓缩获得高纯度的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备Tu Chi多克隆抗体。制备的多克隆抗体经Western Blot证实能特异性地识别几丁质酶而不与非特异性蛋白结合。ELISA分析表明制备的抗体效价达1??80 000,效价较高,为进一步研究二斑叶螨几丁质酶相关功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 二斑叶螨 几丁质酶 原核表达 多克隆抗体 |
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