棉花转基因“喷花法”应用条件优化的研究

针对目前众多的棉花转基因方法存在转化过程复杂、成本高、效率较低等问题，实验对转基因方法一“喷花法”进行优化，明确了在棉花育种科研中应用条件，达到快速、高效转化外源基因的目的。实验选用了5个陆地棉品种(系)和2个海岛棉品种为转化受体材料，转化了2个外源基因-杭虫(Bt+CpTI)和增强纤维品质基因(NPTII-GhCAD6)，并对转化时等渗液各成分的比例、转化的时间段、温度及湿度条件等因素对转化率的影响进行研究。结果表明，转化效率最高时等渗液各成分的含量:陆地棉为1/2MS+10%蔗糖+0.5g/L MES+0. Olmg/L6-BA+200u1/L表面活性剂，pH=6菌株浓度OD600=0.5;海岛棉为1/2MS+15%蔗糖+0.5g/L MES+0.01mg/L6-BA+200u1/L表面活性剂，pH=6菌株浓度OD600=0.5;转化效率最高时转化的时间段为11:00~13:30，相应的温度为22~29℃、湿度为70%~85%;转化后的T0代受体材料，首先在田间进行杭生素检测，然后在获得的阳性植株中，转杭虫基因材料用金标BT-Gry I Ab/Ac试纸条定性检测，转纤维品质基因材料做PCR电泳检测，经检测最终获得了一批转基因阳性植株。最终建立一种应用在农业育种科研中大批量、高效快速、简易实用的转基因方法。