水稻OsCKX2基因表达实时荧光定量PCR检测技术的建立 |
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引用本文: | 高东,魏富刚,何霞红,孟国成,刀丽云,朱有勇.水稻OsCKX2基因表达实时荧光定量PCR检测技术的建立[J].云南农业大学学报,2010,25(3):351-358. |
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作者姓名: | 高东 魏富刚 何霞红 孟国成 刀丽云 朱有勇 |
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作者单位: | 1云南农业大学,农业生物多样性应用技术国家工程研究中心,云南 昆明 650201;2云南省红河州新街镇农业综合服务中心,云南 元阳 662416 |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展规划(973计划) |
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摘 要: | 从水稻花序分生组织总RNA中逆转录扩增总cDNA,PCR扩增OsCKX2基因中设计的目的片段,将纯化的目的片段克隆到pMD19-TSimple载体中,PCR鉴定并测序分析,制备成荧光定量PCR梯度浓度质粒标准品。对重组质粒进行实时荧光定量PCR实验。标准曲线结果表明,建立的OsCKX2基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,特异性好,灵敏度高,可达102拷贝;线性范围广,可达1.0×102~1.0×107拷贝;扩增效率高(E=95.9%);稳定性、重复性好,可靠性高,批内和批间变异系数(CV)仅为:0.14%~0.29%和0.16%~0.35%;循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r=1.000),可对OsCKX2基因表达进行准确实时定量。一个基于TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术,定量分析控制水稻谷粒数关键基因之一OsCKX2转录水平的技术体系被成功建立。该技术体系重组质粒标准品的制备方法具有很强的实用性;对基因OsCKX2的表达实时定量准确、可靠、便捷。
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关 键 词: | 水稻 基因表达 实时定量RT-PCR TaqMan探针 |
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