应用反相高效液相色谱法测定马血浆中维生素B2及其辅酶的含量

目的]建立适用于动物血浆中维生素B2、FMN和FAD含量的测定的反相高效液相色谱法,并测定半岁、一岁、两岁马匹血浆中维生素B2、FMN和FAD的含量.方法]色谱条件:ZORBAX Eclipse XDB-C18 5μm,4.6×250 mm反相色谱柱;10 mM磷酸二氢钾缓冲液(含有15 mM乙酸镁)与乙腈85∶15(V∶V),用85;磷酸调节pH至3.4;流速l mL/min,柱温25℃,上样量为10 μL,检测波长荧光检测,λex =445 nm,λem=530nm.结果]昭苏马场半岁马血浆中维生素B2含量(nmol/L):24.25 ～ 29.51;FMN含量(nmol/L):23.42～25.99;FAD含量(nmol/L):6.79～ 10.18.昭苏马场一岁马血浆维生素B2含量(nmol/L):26.61～ 35.49;FMN含量(nmol/L):41.72～ 66.95;FAD含量(nmol/L):7.45～ 13.56.昭苏马场二岁马血浆维生素B2含量(nmol/L):26.18 ～32.35;FMN含量(nmol/L):36.21 ～44.77;FAD含量(nmol/L):6.88 ～9.14.结论]应用反相高效液相色谱法具有样品处理简单、分离效果良好(维生素B25.9 min、FMN 3.5 min、FAD 3.0 min),易于区分、灵敏度高(维生素B2 3.32 nmol/L、FMN 6.875 nmol/L、FAD 0.484 nmol/L)和精密度良好(维生素B2、FMN和FAD保留时间相对标准偏差分别为0.17;、0.12;和0.75;;峰面积RSD分别为2.25;、3.6;和4.03;)的特点.

Determination of Riboflavin and Riboflavin Cofactor by RP-HPLC in Plasma of Horse