| 源于Paecilomyces sp.FLH30内切β-1,3(4)葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 |
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| 作者单位： | ;1.新疆农业大学动物科学学院/新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室;2.新疆农业大学食品科学与药学学院 |
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| 摘 要： | 【目的】β-1,3(4)-葡聚糖酶是一种重要的工业用酶,广泛地应用于饲料业、酿造业及纺织业。【方法】以来源于Paecilomyces sp.FLH30的葡聚糖酶基因为研究对象。据毕赤酵母GS115对密码子的简并性和偏爱性,对来源于淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)β-1,3(4)-葡聚糖酶基因进行了优化,通过全基因技术合成了全长基因GLUnm并构建重组酵母表达载体p PIC9K-GLUnm,用Sac I线性化重组质粒p PIC9KGLUnm,电击转化至毕赤酵母GS115中进行表达。【结果】通过表型筛选,遗传霉素抗性筛选,经PCR鉴定表明,葡聚糖酶基因整合至酵母染色体DNA中。在试管中经甲醇诱导表达,并测定葡聚糖酶酶活性。在试管水平表达的酶活性是0.68 IU/m L,即可以认为在摇瓶表达水平的初始酶活性为0.68 IU/m L,将此菌株在摇瓶水平表达,酶活性在表达84 h为最高,是11.26 IU/m L。【结论】重组β-1,3(4)-葡聚糖酶的最适p H为5.0,最适反应温度为50℃,在p H 5.0~8.0,温度37~50℃的条件下较稳定。
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| 关 键 词： | β-1 3(4)-葡聚糖酶 毕赤酵母 表达 酶学性质 |
Expression of the Paecilomyces sp.FLH30 endo β-1,3(4)Glucanase Gene in Pichia pastoris |
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