| 猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因的克隆及其表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 刘霞,汤德元,黄涛,徐健,王彬.猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因的克隆及其表达载体的构建[J].黑龙江畜牧兽医,2010(2). |
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| 作者姓名： | 刘霞 汤德元 黄涛 徐健 王彬 |
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| 作者单位： | 贵州大学,动物科学学院,贵州,贵阳,550025 |
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| 基金项目： | 贵州省贵阳市2005年畜牧科技专项基金项目((2005)筑科农字第4-11号):2007年贵州省科技厅基金项目(黔科合J字 |
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| 摘 要： | 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因的表达,研究参照GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株(PRRSV Guizhou-1)的核苷酸序列,利用DNASTAR、Oligo6.0和Primer Premier 5.0软件设计1对ORF5基因的特异性引物,同时将贵州大学动物科学学院分子生物学实验室分离、保存的PRRSV Guizhou-1接种于Marc-145细胞,产生明显细胞病变后收集病毒,用Trizol法提取总RNA进行RT-PCR扩增后获得目的基因,并将其克隆于质粒pMD18-T载体后转入大肠杆菌Top10细胞中,然后分别克隆于原核表达载体pET-32a(+)和真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,再进行抗性筛选、酶切鉴定和序列测定.结果表明:得到含有目的基因的阳性克隆,成功构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因原核表达载体pET-ORF5及真核表达载体pcDNA-ORF5.
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 贵州分离株 ORF5基因 克隆 表达载体 构建 |
Cloning and constructing of the expression vector of ORF5 gene of PRRSV guizhou isolation strain |
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