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| 应用CRISPR/Cas9构建稳定表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞系 | |
| 作者单位： | ;1.武汉生物工程学院生命科学与技术学院应用生物技术研究中心 |
| 摘 要： | 为了构建犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)结构蛋白VP2稳定表达的HEK293T细胞系,以2017年新分离的CPV-WH株为材料,扩增其VP2基因,并进行进化树分析。根据安全插入位点AAVS1位点序列设计sgRNA,并构建Cas9及sgRNA的表达载体PX335-U6-sgRNA-Cas9,同时构建含有VP2的特异性同源序列的片段HM-puro-eGFP-VP2-HA,将两者共转染HEK293T细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定表达VP2的HEK293T细胞株,并通过测序确定VP2正确插入。进化树分析显示CPV-WH的VP2存在S557N、T570K 2个氨基酸突变,该氨基酸位点可能与病毒免疫逃逸有关。通过荧光观察和免疫印迹确定了稳定表达细胞系中VP2的表达。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞,为后期制备CPV样颗粒提供细胞模型。 |
| 关 键 词： | CPV VP2 CRISPR/Cas9技术 稳定表达 |
Establishment of HEK293T cell lines stably expressing canine parvovirus structural protein VP2 by CRISPR/Cas9 |
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| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |