| 猪圆环病毒2型Rep蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达和纯化 |
| |
| 引用本文： | 梁太润,熊谋康,王爽云,张歆明,王志朋,王磊,刘献辉,于林洋,刘燕玲,张乐宜,宋长绪.猪圆环病毒2型Rep蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达和纯化[J].黑龙江畜牧兽医,2023(1):7-13+122-123. |
| |
| 作者姓名： | 梁太润 熊谋康 王爽云 张歆明 王志朋 王磊 刘献辉 于林洋 刘燕玲 张乐宜 宋长绪 |
| |
| 作者单位： | 华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心 |
| |
| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2018YFd0501102)；;广东省重点领域研发计划项目(2019B020211003)； |
| |
| 摘 要： | 为了在Sf9昆虫细胞中表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Rep蛋白，试验以PCV-2毒株(PCV-2b)的DNA为模板扩增ORF1基因，将ORF1基因插入到转移载体质粒pQB3s上，构建重组质粒pQB3s-PCV-2b-Rep,将重组质粒与杆状病毒表达载体qBac-ⅢG共同转染Sf9昆虫细胞，获得P0代重组杆状病毒，经连续传代获得P1、P2、P3代重组杆状病毒，将P3代重组杆状病毒接种到Sf9昆虫细胞中进行悬浮培养，收集细胞并利用镍柱纯化重组表达的蛋白，通过荧光显微镜观察感染重组杆状病毒的Sf9昆虫细胞中的荧光量，通过SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定重组蛋白的表达情况。结果表明：经PCR鉴定在945 bp处出现特异性条带；通过荧光显微镜观察，在转染后第1天就出现绿色荧光，第4～5天出现大量绿色荧光，P2、P3代重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞及P3代重组杆状病毒感染悬浮培养的Sf9昆虫细胞后在第4～5天出现大量绿色荧光；P2、P3代重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞的细胞裂解液及纯化的重组Rep蛋白，通过SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定在约38 ku处出现...
|
| 关 键 词： | 猪圆环病毒2型 重组蛋白Rep Sf9昆虫细胞 杆状病毒表达载体 纯化 |
|
|
