| 快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立 |
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| 引用本文： | 马继红,于海,周艳君,李国新,闫丽萍,张善瑞,王斌,童光志.快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立[J].中国兽医寄生虫病,2010,18(3):1-7. |
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| 作者姓名： | 马继红 于海 周艳君 李国新 闫丽萍 张善瑞 王斌 童光志 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200241 |
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| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目，上海市科技兴农重点攻关项目 |
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| 摘 要： | 根据A型流感病毒基质蛋白（matrix protein,M）基因保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan BHQ探针,建立快速检测A型流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆A型流感病毒M基因靶序列并将其连入pMD-18T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.998。检测结果显示,该方法的灵敏度可达10 copies/μL或1 EID50病毒且特异性良好,除A型流感病毒外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪输血传播病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%。对40份实验感染样品的检测结果表明,该方法与病毒分离结果一致,比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高,特异性更强。
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| 关 键 词： | A型流感病毒 TaqMan探针 实时荧光定量RT-PCR |
DESIGN AND VALIDATION OF REAL-TIME TAQMAN FLUORESCENCE QUANTITATIVE RT-PCR ASSAY FOR RAPID DETECTION OFTYPE A IUFLUENZA VIRUS |
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| MA Ji-hong,YU Hai,ZHOU Yan-jun,LI Guo-xin,YAN Li-ping,ZHANG Shan-rui,WANG Bin,TONG Guang-zhi.DESIGN AND VALIDATION OF REAL-TIME TAQMAN FLUORESCENCE QUANTITATIVE RT-PCR ASSAY FOR RAPID DETECTION OFTYPE A IUFLUENZA VIRUS[J].Chinese Journal of Veterinary Parasitology,2010,18(3):1-7. |
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| Authors: | MA Ji-hong YU Hai ZHOU Yan-jun LI Guo-xin YAN Li-ping ZHANG Shan-rui WANG Bin TONG Guang-zhi |
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| Institution: | (Shanghai Veterinary Research Institute,CAAS,Shanghai 200241,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Type A influenza virus TaqMan probe real-time fluorescent quantitative RT-PCR |
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