液体培养法与qPCR法对检测猪鼻支原体灵敏度比较

为了比较《中国药典》已收录但相当耗时的液体培养法和未收录但相对快速的荧光定量PCR(qPCR)法对支原体检测的灵敏度，试验分别在猪鼻支原体生长的对数期（48 h）、稳定期（96 h）和衰亡期（144 h）取样，将样品10倍系列稀释后，使用液体培养法和qPCR法对各个稀释度进行检测（两种方法的样品加入体积分别为0.5 mL和5μL），以比较二者的灵敏度。结果显示：在存活支原体占比高的对数期和稳定期，液体培养法比qPCR法的检测灵敏度高约100倍；而在死亡支原体占比大幅增加的衰亡期，结果则相反，qPCR法反而比液体培养法的检测灵敏度高约1 000倍。当把对数期样品高速离心浓缩约100倍后再用qPCR法检测，其检测灵敏度比浓缩之前提高了约100倍。上述结果表明：影响液体培养法和qPCR法相对灵敏度的主要因素是各自体系中不同的样品加入体积和样品中存活支原体的比例，而由于前一因素导致的两种方法灵敏度的差异，可以通过高速离心浓缩的方法缩小，使两种方法的相对灵敏度基本相同。