| 猪抑制素α亚基基因克隆及其原核表达 |
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| 引用本文： | 陈倩,黎敏义,刘颖,施振旦.猪抑制素α亚基基因克隆及其原核表达[J].江苏农业学报,2013(1):108-113. |
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| 作者姓名： | 陈倩 黎敏义 刘颖 施振旦 |
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| 作者单位： | 华南农业大学动物科学学院;江苏省农业科学院畜牧研究所 |
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| 基金项目： | 江苏省第八批“六大人才高峰”项目;国家“863”项目(2008AA101003) |
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| 摘 要： | 为了克隆猪抑制素α亚基基因和表达其重组蛋白质,本试验采集发情期蓝塘猪卵巢组织,并从中快速抽提总RNA,以此作为模板并根据猪抑制素α亚基基因编码区序列(GenBank号:NM214189)设计合成1对引物,经反转录扩增获得了猪抑制素α亚基基因编码区全长序列。另外,再设计1对特异性引物以扩增抑制素α亚基成熟肽cDNA,并将扩增产物克隆到表达载体pRSET A的BglⅡ和EcoR I酶切位点之间,构建重组质粒pINH-SCAU并转化Escherichia.coli BL21(DE3)株。转化重组质粒pINH-SCAU的重组菌经IPTG诱导后表达的重组蛋白质分子量为20 000,经Ni-NTA凝胶纯化和兔抗牛抑制素α亚基抗体的特异性免疫反应,证明为抑制素α亚基重组融合蛋白质。对蛋白质表达条件的比较,结果显示重组菌经常规诱导剂0.05 mmol/L IPTG诱导5 h后的细菌生长密度OD600值为2,抑制素α亚基重组融合蛋白质的最高表达量为总菌体蛋白质量的32.00%。采用自动诱导培养基替代IPTG,在诱导18 h后能使菌液的OD600达13,同时自动诱导的抑制素融合蛋白质表达量占菌体总蛋白质的32.57%。因此利用自动诱导培养基可以获得较佳的抑制素重组整合蛋白质。
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| 关 键 词： | 蓝塘猪 抑制素α亚基 成熟肽 克隆 表达 |
Cloning and prokaryotic expression of Lantang porcine inhibin α-subunit gene |
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| CHEN Qian,LI Min-yi,LIU Ying,SHI Zhen-dan.Cloning and prokaryotic expression of Lantang porcine inhibin α-subunit gene[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2013(1):108-113. |
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| Authors: | CHEN Qian LI Min-yi LIU Ying SHI Zhen-dan |
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| Institution: | 1.Department of Animal Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China;2.Institute of Animal Science,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Nanjing 210014,China) |
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