牛β—酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆

采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ，将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物，引物长度１９ｎｔ，跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示，在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近，出现一明显亮带，这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物，煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒，ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ，Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中，经筛选、酶切、测序鉴定，结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。