| 牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)间接原位杂交PCR检测方法的建立与初步应用 |
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| 引用本文： | 李亚楠,白昌明,刘金兰,辛鲁生,李晨,刘莉,黄博闻,魏智薪,王崇明.牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)间接原位杂交PCR检测方法的建立与初步应用[J].水产学报,2019,43(3):679-687. |
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| 作者姓名： | 李亚楠 白昌明 刘金兰 辛鲁生 李晨 刘莉 黄博闻 魏智薪 王崇明 |
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| 作者单位： | 天津农学院水产学院, 天津市水产生态及养殖重点实验室, 天津 300384;中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071,天津农学院水产学院, 天津市水产生态及养殖重点实验室, 天津 300384,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071,天津农学院水产学院, 天津市水产生态及养殖重点实验室, 天津 300384;中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071,中国水产科学研究院黄海水产研究所, 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室, 农业部海水养殖病害防治重点实验室, 青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室, 山东 青岛 266071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31502208，31302233）；现代农业产业技术体系建设专项（CARS-48） |
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| 摘 要： | 为建立实现牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在贝类宿主组织中的精确定位方法,基于原位杂交PCR (ISPCR)技术建立了OsHV-1的间接原位杂交PCR (indirect ISPCR)检测方法,并利用该方法对OsHV-1在魁蚶主要器官的分布情况进行了检测和分析。首先选择适合原位杂交PCR的引物,在载玻片上实现对原位固定靶组织内病毒DNA的稳定、特异扩增,然后与使用相同引物制作的地高辛标记核酸探针进行原位杂交,最后通过免疫酶标技术显示样本内OsHV-1的组织分布。为了达到最佳检测效果,对间接ISPCR的扩增循环数以及组织消化的蛋白酶K浓度进行优化。结果显示,最适PCR扩增循环数为20,蛋白酶K浓度为20μg/mL。利用经优化的间接ISPCR检测方法,对OsHV-1在魁蚶外套膜、鳃、肝胰腺、斧足和闭壳肌5个样本中的组织分布情况和亲嗜性进行检测和分析。病毒阳性信号主要分布于魁蚶外套膜结缔组织中浸润的血细胞和成纤维细胞、肝胰腺和鳃浸润的血细胞、斧足和闭壳肌中坏死肌肉细胞的细胞核中。本研究建立的间接ISPCR检测方法具有灵敏、特异和精确定位的优点,通过组织切片上显示的病毒核酸阳性信号,能判别OsHV-1在不同组织部位的分布特点和受感染的细胞类型;适用于OsHV-1感染的确诊、病毒对不同组织器官的亲嗜性、病毒侵染途径和致病机理等相关研究。
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| 关 键 词： | 魁蚶 牡蛎疱疹病毒 间接原位杂交PCR 检测方法 |
| 收稿时间： | 2018/5/15 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/6/4 0:00:00 |
Establishment and application of indirect in situ polymerase chain reaction for detection of Ostreid herpesvirus-1 (OsHV-1) |
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| LI Yanan,BAI Changming,LIU Jinlan,XIN Lusheng,LI Chen,LIU Li,HUANG Bowen,WEI Zhixin and WANG Chongming.Establishment and application of indirect in situ polymerase chain reaction for detection of Ostreid herpesvirus-1 (OsHV-1)[J].Journal of Fisheries of China,2019,43(3):679-687. |
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| Authors: | LI Yanan BAI Changming LIU Jinlan XIN Lusheng LI Chen LIU Li HUANG Bowen WEI Zhixin and WANG Chongming |
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| Institution: | Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture, College of Fishery, Tianjin Agriculture University, Tianjin 300384, China;Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture, College of Fishery, Tianjin Agriculture University, Tianjin 300384, China,Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Tianjin Key Laboratory of Aqua-Ecology and Aquaculture, College of Fishery, Tianjin Agriculture University, Tianjin 300384, China;Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China and Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture, Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology, Qingdao Key Laboratory of Mariculture Epidemiology and Biosecurity, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Scapharca broughtonii Ostreid herpesvirus-1 indirect ISPCR detection method |
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