边界病病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起，导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病，2012年在国内首次报道，但目前尚无特异的RT-PCR方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列，以3′-UTR基因为靶基因，设计了特异扩增BDV的引物。通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的RT-PCR检测方法。进一步优化该方法的反应条件，并进行特异性、敏感性及临床样品检测。结果显示，该方法在退火温度48～60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性，表明其特异性良好；同时，该方法具有良好的敏感性，最低检出限可达10¹拷贝/μL,敏感性极高。利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊，发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3～7 d的血液和淋巴结...