| 酵母端粒酶RNA的制备及其构型影响因素分析 |
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| 引用本文： | 谢 艳,傅 晶,奚绪光,等.酵母端粒酶RNA的制备及其构型影响因素分析[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2014,42(4):187-193. |
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| 作者姓名： | 谢 艳 傅 晶 奚绪光 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 生命科学学院;西北农林科技大学 生命科学学院;西北农林科技大学 生命科学学院 |
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| 基金项目： | 教育部回国人员科研启动基金项目 |
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| 摘 要： | 【目的】体外转录并纯化酵母端粒酶RNA,明确缓冲液中组分对其构型的影响,初步研究四膜虫端粒酶相关蛋白p65与酵母端粒酶RNA的结合情况,为酵母端粒酶活性鉴定及构型功能研究奠定基础。【方法】利用核酶的自剪切功能,通过在3′端引入HDV核酶序列获得完整的酵母端粒酶RNA;并用分子筛SuperDeX-200/16/60凝胶过滤纯化酵母端粒酶RNA;琼脂糖凝胶电泳检测RNA Buffer组分中NaCl和MgCl2浓度对酵母端粒酶RNA构型的影响;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测四膜虫端粒酶相关蛋白p65与酵母端粒酶RNA的结合情况。【结果】通过基因序列合成,结合PCR扩增方法获得了酵母端粒酶RNA基因,并将其构建到体外转录载体上;体外转录获得大量的酵母端粒酶RNA(Yeast-RNA-239);使用SuperDeX-200/16/60成功分离得到了纯净的Yeast-RNA-239。NaCl、MgCl2浓度对酵母端粒酶RNA构型有一定的影响,表现为没有NaCl或MgCl2时,RNA的构型均一且致密;随NaCl、MgCl2浓度的增大,RNA构型逐渐变得松散;而四膜虫端粒酶相关蛋白p65能与酵母端粒酶RNA有效结合。【结论】在体外成功制备了高纯度的酵母端粒酶RNA,NaCl、MgCl2浓度对其构型有影响,四膜虫端粒酶相关蛋白p65能够帮助端粒酶RNA正确折叠。
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| 关 键 词： | 体外转录 端粒酶RNA 端粒 端粒酶相关蛋白p65 |
| 收稿时间： | 4/9/2013 12:00:00 AM |
Preparation of the yeast telomerase RNA and analysis of the factors influencing its configuration |
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| XIE Yan,FU Jing and XI Xu-guang,et al.Preparation of the yeast telomerase RNA and analysis of the factors influencing its configuration[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2014,42(4):187-193. |
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| Authors: | XIE Yan FU Jing and XI Xu-guang |
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