H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立

【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）可视化快速检测技术，为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素（HA）基因序列，设计一套针对HA基因6个区域的4条特异性引物，在反应之前向反应液中加入荧光试剂（Calcein/MnCl2混合液），然后对反应条件和体系进行优化。【结果】优化的RT-LAMP技术操作简便迅速，常规水浴锅中50 min可完成，能特异性地检测出H5亚型AIV，但对其他HA亚型AIV、禽呼吸道病原体无交叉扩增反应，灵敏度是常规RT-PCR的10倍；反应结束后无需打开反应管盖，即可根据反应液的颜色变化对结果进行判定。【结论】建立的H5亚型AIV RT-LAMP可视化检测技术具有简便、快速、特异等特点，可在设备有限的基层兽医站及养殖场对H5亚型AIV进行快速初步诊断。