| 小鼠Nr1d1基因生物信息学分析及其慢病毒干扰载体的构建 |
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| 引用本文： | 李雅婷,张靖,江海圳,高登科,李超,靳亚平,陈华涛.小鼠Nr1d1基因生物信息学分析及其慢病毒干扰载体的构建[J].江西农业大学学报,2022(1):186-197. |
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| 作者姓名： | 李雅婷 张靖 江海圳 高登科 李超 靳亚平 陈华涛 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物医学院;2. 农业农村部动物生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目（31771301）；;中国博士后科学基金第11批特别资助（2018T111112）~~； |
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| 摘 要： | 【目的】研究旨在分析小鼠Nr1d1基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能,构建并筛选出干扰效率最优的小鼠Nr1d1基因慢病毒干扰载体。【方法】对小鼠Nr1d1核苷酸序列和氨基酸序列进行生物信息学分析;设计合成4对小鼠Nr1d1基因的特异性shRNA序列和1对无义序列;分别将它们连接至pCD513B-U6慢病毒干扰载体上构建重组质粒,通过PCR及测序鉴定,分别将鉴定正确的重组质粒命名为pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-1(sh1)、pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-2(sh2)、pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-3(sh3)、pCD513B-U6-shRNANr1d1-4(sh4)和pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-NC(shn);将重组质粒和辅助包装质粒共转染至HEK293T细胞中,收毒后将病毒颗粒感染小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3细胞);使用荧光显微镜观察HEK293T细胞和NIH3T3细胞中的绿色荧光蛋白表达情况;Western Blotting检测并筛选出干扰效率最佳的载体。【结果】小鼠Nr1d1基因编码区序列全长1 848 bp...
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| 关 键 词： | NR1D1 慢病毒载体 RNA干扰 生物信息学 |
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