| 埃及伊蚊免疫应答相关基因mapk-like的dsRNA原核表达及其饲喂后表达水平的变化 |
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| 引用本文： | 吴松青,刘昭霞,苏伟超,王官栋,陈慧成,吴志卯,关雄,张灵玲.埃及伊蚊免疫应答相关基因mapk-like的dsRNA原核表达及其饲喂后表达水平的变化[J].农业生物技术学报,2014(11). |
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| 作者姓名： | 吴松青 刘昭霞 苏伟超 王官栋 陈慧成 吴志卯 关雄 张灵玲 |
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| 作者单位： | 1. 福建农林大学林学院，福州350002; 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州350002
2. 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室,福州,350002 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目，教育厅高校领军人才，国家卫生计生委共建科学研究基金，国家自然科学基金，国家粮食局'粮食公益性行业科研专项'，福建省科技计划重点项目，福建省自然科学基金，福建省高校杰出青年科研人才培育计划，福建省新世纪人才支持计划 |
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| 摘 要： | mapk-like是一种信号转导相关促有丝分裂激活蛋白激酶家族基因，与线虫(Caenorhabditis elegans)中参与抵御Cry毒素的p38 MAPK含有类似的模序，其是否参与埃及伊蚊(Aedes aegypti)抵御苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)过程有待验证。为简便并大量获得RNAi验证所需的dsRNA，本研究利用RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌(Escherichia coli) HT115高效和廉价的优点，根据已测序的促有丝分裂激活蛋白激酶家族基因mapk-like基因序列，设计特异性引物，PCR扩增大小为361 bp的目的片段mapk-like (GenBank登录号：AAEL003728-RA)，将其连接到克隆载体pMD18-T上，利用限制性内切酶XbaⅠ和XhoⅠ将其插入到原核表达载体pLitmus28i的2个T7启动子之间，成功构建可诱导形成目的双链RNA (dsRNA)的原核表达重组载体pLitmus28i-mapk-like，并转化大肠杆菌HT115，经IPTG诱导，1 mL菌液的dsRNA产量可达1.18μg，电泳检测条带清晰，质量良好。此外，利用壳聚糖包裹dsRNA形成纳米微粒，上清经电泳检测表明，壳聚糖的聚沉效率良好，纳米微球可有效防止dsRNA从饲料琼脂块中游离出来，提高dsRNA的稳定性。埃及伊蚊幼虫摄取mapk-like基因的dsRNA后，相对转录表达水平为65.55%，表达量明显下调，饲喂效果良好。研究结果将有利于进一步筛选获得相关抵御基因，为建立一个基于RNA沉默防治蚊媒病的研究体系提供了基础资料。
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| 关 键 词： | pLitmus28i RNaseⅢ缺失菌株 dsRNA |
Prokaryotic Expression of dsRNA Based on the mapk-like Gene Related to Immune Response of Aedes aegypti and the Changes in Expression Levels After Feeding |
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| WU Song-Qing,LIU Zhao-Xia,SU Wei-Chao,WANG Guan-Dong,CHEN Hui-Cheng,WU Zhi-Mao,GUAN Xiong,ZHANG Ling-Ling.Prokaryotic Expression of dsRNA Based on the mapk-like Gene Related to Immune Response of Aedes aegypti and the Changes in Expression Levels After Feeding[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2014(11). |
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| Authors: | WU Song-Qing LIU Zhao-Xia SU Wei-Chao WANG Guan-Dong CHEN Hui-Cheng WU Zhi-Mao GUAN Xiong ZHANG Ling-Ling |
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| Keywords: | pLitmus28i RNaseⅢ-absent strain dsRNA |
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