梨小食心虫实时荧光PCR检测技术的建立与验证

梨小食心虫（Grapholitha molesta）为我国常见蛀果性害虫，与其他梨果害虫的组织形态非常相似，仅凭形态学特征难以区分，需建立实时荧光PCR检测方法在基因水平上进行鉴定。通过样品核酸提取与质控，设计并验证荧光探针特异性，进一步通过优化反应条件和反应体系，结合特异性分析、灵敏性比对和盲样测试开发了梨小食心虫实时荧光定量PCR检测方法。结果表明：方法特异性强，重复性好（重复间变异系数为0.055~0.359），可靠性高（标准曲线中的R2值为0.991），检出限低（最低检出限3 pg/μL），盲样测试结果与形态学鉴定结果一致，能满足日常检验检疫需求。该操作方法简单易行，检测时限短（约3 h），通量高，特别适合于大批量的抽样检查，可应用于梨小食心虫的检疫工作。

Establishment and Validation of Real-Time Fluorescence Quantitative PCR for Identification of Grapholitha molesta