羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析 |
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引用本文: | 钟灵毓,王元红,白彩霞,杨侃侃,俞赵荣,鲁智敏,张学琪,刘自敏,蒋书东,李永东,王勇.羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析[J].江苏农业学报,2019(3). |
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作者姓名: | 钟灵毓 王元红 白彩霞 杨侃侃 俞赵荣 鲁智敏 张学琪 刘自敏 蒋书东 李永东 王勇 |
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作者单位: | 安徽农业大学动物科技学院;宁波市疾病预防控制中心 |
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摘 要: | 为了对羊口疮病毒(ORFV) AH-F10株127基因进行原核表达及亚细胞定位,本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因,成功构建原核表达重组质粒pG EX-6p-1-ORFV127和真核重组质粒pE GFP-N1-ORFV127。将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达,并进行纯化和鉴定。以纯化的蛋白质免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Western-blot技术鉴定其反应原性。利用脂质体介导法将重组质粒pE GFP-N1-ORFV127转染至Vero细胞,通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果表明,获得的ORFV127基因序列全长为558bp,ORFV127蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,主要以包涵体蛋白质的形式表达,大小约49 000。Western-blot结果显示,免疫小鼠获得的抗ORFV127蛋白的多克隆抗体可特异性识别ORFV127蛋白,倒置荧光显微镜观察发现,ORFV127蛋白主要定位于细胞质。本试验结果为后续研究ORFV127蛋白的功能提供了宝贵的生物材料。
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