PRV定量PCR检测方法的建立及其在猪精液检测中的初步应用

文章根据PRV基因序列,设计特异性引物扩增g H基因,构建重组质粒;优化实验条件,建立PRV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果表明该方法的标准曲线线性关系良好,R2=0.998,E=103.854%;特异性强,检测猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环2型病毒、猪乙脑病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗等均无扩增曲线;灵敏度高,最低可检测到的27.9拷贝;在公猪精液中最低可检测到病毒量为16TCID_(50)/100μL,可重复验证,变异系数均低于3.5%;利用该方法对湖南省109份公猪精液样品进行了检测,发现20份阳性样品,阳性率为18.35%,比国标普通PCR法检出率高。该方法的建立将为PRV的流行病学调查提供可靠的技术支持。