| 猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 郑兰兰,张君涛,李明凤,等.猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立[J].中国兽医学报,2014(3):366-370,378. |
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| 作者姓名： | 郑兰兰 张君涛 李明凤 等 |
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| 作者单位： | ;1.河南农业大学牧医工程学院;2.河南省动物性食品安全重点实验室 |
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| 摘 要： | 参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒(PRV)gH基因与猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因的部分片段。将测序正确的PRV gH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果显示,PCV2与PRV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80.8℃和86.7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝/μL和180拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断。
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| 关 键 词： | 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病毒 SYBR GreenⅠ |
Simultaneous detection of porcine pseudorabies virus and porcine circovirus 2 by duplex real-time PCR |
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