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| 利用CRISPR/Cas9技术编辑水稻香味基因Badh2 | |
| 作者姓名： | 祁永斌 张礼霞 王林友 宋建 王建军 |
| 作者单位： | 浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所,杭州 310021 |
| 基金项目： | 浙江省科技厅公益技术研究项目(2017C32007);浙江省粮食新品种选育重大科技专项(2016C02050);国家重点研发计划“七大作物育种”重点专项(2017YFD0100302);浙江省农业科学院人才培养项目(2018R16R08E01) |
| 摘 要： | 【目的】稻米香味是水稻品质改良的一个重要内容,其性状主要受1个隐性基因Badh2的控制。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将常规品种中的Badh2进行编辑,从而获得Badh2发生突变的基因编辑株系,使香味性状得到改良。【方法】利用CRISPR/Cas9基因编辑的原理,在水稻Badh2的第2和第7外显子处设计靶点,通过BLAST分析确定其特异性并构建到CRISPR/Cas9表达载体。以浙江省主要推广的水稻品种嘉58和秀水134的愈伤组织为受体,利用农杆菌介导的遗传转化法,通过潮霉素抗性筛选获得阳性转基因植株。转基因株系经测序明确其在Badh2的突变类型,经PCR分析与鉴定获得Badh2发生突变并无转基因标记成分的稳定株系。利用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)检测基因编辑株系糙米米粉中2-AP的含量,明确其香味成分与非转基因对照之间的差异。【结果】在水稻第2和第7外显子处设计靶点构建表达载体,通过遗传转化转基因株系的Badh2完成了定向突变。共获得T0代嘉58基因编辑的株系15株,在第2外显子处发生突变的有8株5种不同的突变类型,均为不同单碱基插入不同位点;在第7... |
| 关 键 词： | 水稻 CRISPR/Cas9 基因编辑 Badh2 香味 |
| 收稿时间： | 2019-09-02 |
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