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水稻叶绿体基因组定点表达载体的构建及增强型绿色荧光蛋白原核表达分析
引用本文:谢灵灵,李丁,崔玲玲,严礼,左佳,贺荣华,赵迎曦,高婧,曹孟良.水稻叶绿体基因组定点表达载体的构建及增强型绿色荧光蛋白原核表达分析[J].杂交水稻,2011,26(5).
作者姓名:谢灵灵  李丁  崔玲玲  严礼  左佳  贺荣华  赵迎曦  高婧  曹孟良
作者单位:1. 中南大学研究生院隆平分院杂交水稻国家重点实验室,湖南长沙,410125
2. 湖南隆平高科基因科技有限公司,湖南长沙,410125
3. 中南大学研究生院隆平分院杂交水稻国家重点实验室,湖南长沙410125;湖南隆平高科基因科技有限公司,湖南长沙410125;国家杂交水稻工程技术研究中心,湖南长沙410125
基金项目:国家转基因重大专项(2008ZX08001、2009ZX08001-010B、2009ZX08009-016B); 973项目(2007CB109007); 国家科技支撑计划(2007BAD77B00)
摘    要:分别克隆了水稻叶绿体基因组同源重组片段trnI和trnA、具有3种不同核糖体结合位点(RBS)序列的增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)、来自烟草叶绿体的16S rRNA基因启动子Prrn和psbA基因终止子TpsbA,将上述元件通过酶切位点依次连接到质粒pUC19上,构建了3种能编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的水稻叶绿体基因组定点整合表达载体pIA - EGFP1、pIA - EGFP2和pIA - EGFP3.进行分子检测验证后,对上述载体进行了大肠杆菌EGFP原核表达检测,结果携带来源于λ噬菌体T7基因10的5′端非翻译区的载体pIA - EGFP3荧光最强,适合用于水稻叶绿体转化.

关 键 词:水稻  叶绿体表达载体  原核表达  增强型绿色荧光蛋白(EGFP)

Construction of Rice Chloroplast-specific Expression Vectors and Detection on Prokaryotic Expression by EGFP
XIE Ling-ling,LI Ding,CUI Ling-ling,YAN Li,ZUO Jia,HE Rong-hua,ZHAO Ying-xi,GAO Jing,CAO Meng-liang.Construction of Rice Chloroplast-specific Expression Vectors and Detection on Prokaryotic Expression by EGFP[J].Hybrid Rice,2011,26(5).
Authors:XIE Ling-ling  LI Ding  CUI Ling-ling  YAN Li  ZUO Jia  HE Rong-hua  ZHAO Ying-xi  GAO Jing  CAO Meng-liang
Institution:XIE Ling-ling1,LI Ding1,CUI Ling-ling2,YAN Li2,ZUO Jia1,HE Rong-hua1,ZHAO Ying-xi2,GAO Jing1,CAO Meng-liang1,2,3,(1.Longping Branch,Central South University,Changsha,Hunan 410125,China,2.Hunan Longping Gene Limited Company,3.State Key Laboratory of Hybrid Rice,National Hybrid Rice R & D Center,China)
Abstract:The elements for rice chloroplast-specific expression vectors were cloned.The fragments of TrnI and TrnA were obtained by PCR from rice,with 1 388 bp and 824 bp in length,respectively,by sequence analysis.Three enhanced green fluorescent protein genes(egfp) with different ribosome binding sites(RBS) were amplified by PCR from pEGFP-N2 plasmid as a template.The promoter Prrn and the terminator TpsbA were from tobacco and were cloned by PCR amplification of pLM21.Three rice chloroplast-specific expression vec...
Keywords:rice  chloroplast expression vector  prokaryotic expression  enhanced green fluorescent protein(EGFP)  
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