非洲猪瘟病毒P30-54融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及反应原性研究 |
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引用本文: | 李杰,张星星,郭晶,张国武,王晓婷,李妍,才学鹏,孟庆玲,乔军.非洲猪瘟病毒P30-54融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及反应原性研究[J].西南农业学报,2019(3). |
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作者姓名: | 李杰 张星星 郭晶 张国武 王晓婷 李妍 才学鹏 孟庆玲 乔军 |
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作者单位: | 石河子大学动物科技学院;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所;中国农业科学院兰州兽医研究所 |
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摘 要: | 【目的】非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种严重危害猪养殖业的急性烈性传染病。【方法】为了制备特异性强、敏感性高的ASFV血清学诊断用抗原,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了ASFV P30-54融合蛋白基因。将P30-54融合蛋白基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBac1中,构建重组质粒pFastBac-P30-54;将重组质粒转化DH10 Bac感受态细菌进行重组,经抗性与蓝白斑筛选得到杆状病毒重组质粒Bacmid-P30-54;将reBacmid-P30-54转染sf9细胞,获得重组杆状病毒reAcMNPV-P30-54。将获得的reAcMNPV-P30-54接种sf9细胞,待细胞出现CPE时收集细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)和SDS-PAGE进行分析重组蛋白的表达情况;通过Western blot检测重组蛋白的反应原性。【结果】在重组杆状病毒中成功表达P30-54蛋白,该重组蛋白可与ASFV多克隆抗体发生免疫学反应。【结论】证实该重组蛋白具有良好的反应原性。
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