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| 奶牛乳腺上皮细胞的不同培养方法比较及激素和细胞因子对β-酪蛋白mRNA表达的诱导 | |
| 引用本文： | 李文清,王加启,南雪梅,卜登攀.奶牛乳腺上皮细胞的不同培养方法比较及激素和细胞因子对β-酪蛋白mRNA表达的诱导[J].动物营养学报,2014,26(9). |
| 作者姓名： | 李文清 王加启 南雪梅 卜登攀 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;河南农业大学生命科学学院,郑州450002 2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193 3. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;CAAS-ICRAF农用林业与可持续畜牧业联合实验室,北京100193 4. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193;CAAS-ICRAF农用林业与可持续畜牧业联合实验室,北京100193;东北农业大学,食品安全与营养协同创新中心,哈尔滨150030 |
| 基金项目： | 十二五科技支撑计划课题，中国农业科学院科技创新工程，动物营养学国家重点实验室自主课题 |
| 摘 要： | 本试验旨在建立一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,并研究不同激素和细胞因子对其表达β-酪蛋白mRNA的诱导作用.分别采用组织块培养法和机械破碎法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用成纤维细胞和乳腺上皮细胞对胰酶的敏感性不同,对获得的细胞进行纯化.通过细胞计数法测定纯化细胞的生长曲线,通过免疫荧光组织化学染色法检测角蛋白18的表达,通过实时定量PCR法检测8种不同激素和细胞因子组合培养液诱导细胞表达β-酪蛋白mRNA的效果.结果表明:通过机械破碎法可以分离得到增殖旺盛的奶牛乳腺上皮细胞,与组织块培养法相比,具有细胞迁出速度快等优点.细胞生长曲线呈典型的“S”型.在纯化的乳腺上皮细胞及第20代乳腺上皮细胞中都检测到角蛋白18的表达.100 ng/mL类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)显著提高了乳腺上皮细胞中β-酪蛋白mRNA的表达(P＜0.05).由结果可知,本试验采用的机械破碎法是一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,100 ng/mL IGF-Ⅰ对细胞中β-酪蛋白mRNA表达的诱导效果最好. |
| 关 键 词： | 原代细胞培养 乳腺上皮细胞 激素 β-酪蛋白mRNA |
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