奶山羊催乳素受体基因CDS区的克隆和序列分析与腺病毒干扰载体的构建

本文旨在克隆奶山羊催乳素受体(PrlR)基因CDS序列,在此基础上构建针对奶山羊PrlR的腺病毒干扰载体,为研究PrlR在奶山羊乳腺乳脂合成代谢中的功能与调控作用提供有效的RNA干扰工具。首先从西农萨能羊乳腺组织RNA中扩增得到完整CDS区序列,其CDS长为1 746 bp,包含581个氨基酸序列,GenBank登录号为JF966783;测序后进行序列分析和功能预测,奶山羊PrlR基因CDS区与其他反刍动物相应序列具有较高的同源性,其跨膜区为第236~258位氨基酸;然后根据测序得到的CDS序列,在线设计合成奶山羊PrlR的shRNA序列并成功构建重组干扰腺病毒载体;将这些载体在293细胞系中进行包装和扩繁,最终获取高滴度的腺毒,使用TCID50法检测病毒滴度为5.19×108 PFU/m L。