禽流感病毒通用型RT-LAMP快速检测方法的建立

为建立一种禽流感病毒(AIV)的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术(LAMP)原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检测结果均为阳性,而对其他禽类病毒的扩增均为阴性,具有良好的特异性。对AIV的最低检测限为13.43 EID50/m L,灵敏度为普通一步RT-PCR的10倍;扩增反应可以在恒温水浴内60 min内完成;在反应体系中添加荧光染料后,肉眼即可判定检测结果。该检测方法与RT-PCR方法和荧光定量RT-PCR方法对临床样品检测的符合率均为81.8%。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AIV。