| 虉草ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选 |
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| 引用本文： | 张永亮,刘鹏,骆秀梅,刘杨.虉草ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选[J].草原与草坪,2016(3). |
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| 作者姓名： | 张永亮 刘鹏 骆秀梅 刘杨 |
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| 作者单位： | 内蒙古民族大学,内蒙古通辽,028042 |
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| 基金项目： | 内蒙古自然科学基金(2015MS0337)，内蒙古民族大学市校合作项目(SXYB2012077) |
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| 摘 要： | 22个虉草基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验方法,对影响PCR扩增体系中dNTP、引物浓度、Taq酶和模板DNA用量4个因素及引物退火温度进行梯度试验,优化得到最佳的ISSR-PCR反应体系,即20μL反应体系中分别加入0.3μL Taq DNA聚合酶(5U/μL),2μL 10×PCR Buffer(mg2+plus),1.5μL dNTP(2.5mmol/L),1.5μL引物(10pmol/μL),50ng模板DNA,ddH2O补足体积。以此体系对24条引物进行筛选,最终获得了多态性高,重复性好的引物12条。引物UBC808、809、811、815、818、820、826的适宜退火温度为55℃,引物835,841和842的适宜退火温度为56℃,而引物810和834的适且退火温度分别为52℃和54℃。12条引物共扩增总条带数192条,其中,多态性条带数173条,多态位点百分率89.81%。
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| 关 键 词： | 虉草 ISSR-PCR反应体系 引物筛选 |
Optimization of ISSR-PCR reaction system and primer selection for Phalaris arundinacea |
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| ZHANG Yong-liang,LIU Peng,LUO Xiu-mei,LIU Yang.Optimization of ISSR-PCR reaction system and primer selection for Phalaris arundinacea[J].Grassland and Turf,2016(3). |
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| Authors: | ZHANG Yong-liang LIU Peng LUO Xiu-mei LIU Yang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Phalaris arundinacea ISSR-PCR reaction system primer selection |
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