| 含有α-胰凝乳蛋白酶作用位点的Cry3A突变体的构建、表达、纯化以及杀虫活性分析 |
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| 引用本文： | 刘京国,赵晓萌,杨爱珍,师光禄.含有α-胰凝乳蛋白酶作用位点的Cry3A突变体的构建、表达、纯化以及杀虫活性分析[J].中国农业科学,2011,44(7):1384-1389. |
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| 作者姓名： | 刘京国 赵晓萌 杨爱珍 师光禄 |
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| 作者单位： | 北京农学院生物技术学院/农业部都市农业(北方)重点开放实验室,北京,102206 |
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| 摘 要： | 目的]构建含有α-胰凝乳蛋白酶作用位点的Cry3A的突变体Cry3Am,以期提高Cry3A的活化效率,增强杀虫活性.方法]利用重叠PCR技术,构建Cry3A杀虫蛋白的突变体Cry3Am,使之在原核细胞中表达纯化突变体蛋白;将Cry3Am与饲料混合后饲喂黄粉虫,用以评价Cry3Am的杀虫活性.结果]成功地在Cry3h杀虫蛋白结构域I的α3和α4之间加上1个α-胰凝乳蛋白酶的作用位点,并提取Cry3Am到杀虫蛋白.体外酶切试验结果表明,Cry3Am很容易地被降解为55 kD的杀虫蛋白.生测分析结果表明,Cry3Am对黄粉虫的毒力是Cry3A的2倍以上.结论]向Cry3A中插入α-胰凝乳蛋白酶作用位点可以使突变体Cry3Am很容易地被α-胰凝乳蛋白酶降解成55 kD的片段,并能提高Cry3A的杀虫活性.
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| 关 键 词： | Cry3A突变体 α-胰凝乳蛋白酶 表达纯化 杀虫活性分析 |
| 收稿时间： | 2010-07-30 |
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