| 金莲花ISSR-PCR反应体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 包金花,杨恒山,庄得凤,斯日古楞,陈晶,何陈林,李志军,李旭新.金莲花ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J].分子植物育种,2022(1). |
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| 作者姓名： | 包金花 杨恒山 庄得凤 斯日古楞 陈晶 何陈林 李志军 李旭新 |
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| 作者单位： | 内蒙古民族大学农学院 |
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| 基金项目： | 内蒙古自然科学基金面上项目(2019MS08170);内蒙古自治区高等学校科学技术研究项目(NJZY19154);内蒙古民族大学自治区科技储备项目(2018MDCB04);内蒙古民族大学创新创业训练计划项目(201910136016)共同资助。 |
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| 摘 要： | 为了建立金莲花ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以内蒙古自治区境内野生金莲花为试验材料,采用L16(45)正交实验设计,对影响ISSR-PCR扩增结果的dNTPs、Taq DNA聚合酶、DNA模板、Mg2+、引物5个因素进行优化筛选,对反应程序进行优化。结果显示,每个因素都具有极显著差异,影响最大的为dNTPs,其余依次为Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物,影响最小的为Mg2+浓度。最佳反应体系为:DNA模板30 ng,引物0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶0.075 U/20μL,dNTPs 0.15 mmol/L,Mg2+1.0 mmol/L,反应总体积20μL。最佳扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,52℃退火1 min,72℃延伸100 s,最后72℃延伸7 min,共38个循环,4℃保存。采用优化后的体系对金莲花不同居群进行验证,证明优化后体系扩增出明亮清晰的条带且重复性好,可用于后续金莲花遗传多样性分析。
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| 关 键 词： | 金莲花 ISSR-PCR 反应体系 正交实验 |
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Trollius chinensis |
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| Bao Jinhua,Yang Hengshan,Zhuang Defeng,Siriguleng,Chen Jing,He Chenlin,Li Zhijun,Li Xuxin.Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Trollius chinensis[J].Molecular Plant Breeding,2022(1). |
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| Authors: | Bao Jinhua Yang Hengshan Zhuang Defeng Siriguleng Chen Jing He Chenlin Li Zhijun Li Xuxin |
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| Institution: | (College of Agronomy,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao,028043) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Trollius chinensis ISSR-PCR Reaction system Orthogonal design |
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