| AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达 |
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| 引用本文： | 丁银巧,张文杰,张云霞,赵铁柱,孙明,遇秀玲,赵德明,田克恭.AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达[J].中国畜牧兽医,2009,36(7):63-67. |
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| 作者姓名： | 丁银巧 张文杰 张云霞 赵铁柱 孙明 遇秀玲 赵德明 田克恭 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业大学动物医学院,北京,100193;中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室,北京,100193
2. 中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室,北京,100193
3. 中国农业大学动物医学院,北京,100193 |
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| 摘 要： | 利用杆状病毒表达系统对Asia Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VPl基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白功能及建立Asia Ⅰ型FMDV血清学诊断方法奠定基础.采用PCR方法从pGEM-T-Easy-Asia Ⅰ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BaeHTA-VPl再转入DH10Bae感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Baemid-VPl,然后转染Sf9昆虫细胞.PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Baemid-VP1,SDS-PAGE和West-ern-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白.将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出Asia Ⅰ型口蹄疫病毒阳性血清.Asia Ⅰ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | Asia Ⅰ型口蹄疫病毒 VP1基因 杆状病毒 真核表达 |
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