| ADIPOQ shRNA在猪前体脂肪细胞中转染体系的优化 |
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| 引用本文： | 李付娟,王帅,朱亚楠,任久生,柳思源,徐靖博,张阳阳,孙广杰,高妍. ADIPOQ shRNA在猪前体脂肪细胞中转染体系的优化[J]. 中国兽医学报, 2013, 33(4) |
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| 作者姓名： | 李付娟 王帅 朱亚楠 任久生 柳思源 徐靖博 张阳阳 孙广杰 高妍 |
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| 作者单位： | 1. 吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学实验动物中心,吉林长春130062
2. 吉林大学实验动物中心,吉林长春,130062 |
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| 基金项目： | 项目:吉林省重大科技专项资助项目 |
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| 摘 要： | 根据Genbank提供的猪ADIPOQ基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到pGPU6/GFP/Neo中U6启动子的下游,转化DH5α菌株,双酶切鉴定正确后进行测序,将构建好的真核表达载体转染前体脂肪细胞,并对条件进行优化.限制性内切酶PstⅠ和BamHⅠ酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,测序结果显示插入片断与设计序列完全一致,证明重组质粒构建成功,转入到前体脂肪细胞中,可以看见绿色荧光蛋白表达.当质粒浓度0.6μg,脂质体2000是1.2μL,两者质量/体积比为1∶2时,此时转染效率最高,达到53.9％.成功构建了猪ADIPOQ基因的shRNA真核表达载体,并成功将该质粒转入猪的前体脂肪细胞中去,还对质粒与脂质体2000用量比条件进行了优化,此举能为进一步研究ADI-POQ在猪前体脂肪细胞中的功能奠定了良好的基础.
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| 关 键 词： | ADIPOQ基因 shRNA 真核表达载体 RNAi 前体脂肪细胞 |
Optimization of ADIPOQ shRNA transfection system in porcine preadipocyte |
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