抗猪圆环病毒2b/2d亚型衣壳蛋白纳米抗体的制备与鉴定

采用原核表达系统表达了PCV2b/2d-Cap的重组纳米抗体，并对其与PCV2b和PCV2d亚型Cap蛋白的结合能力进行了初步探索。以羊驼筛选到的纳米抗体基因为模板，通过PCR将纳米抗体基因片段进行扩增。经双酶切及连接反应后，将纳米抗体基因片段(VHH)插入到经改造的pET28a-SUMO载体中，构建了pET28a-SUMO-VHH重组质粒。将构建好的质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达。表达产物通过亲和层析、除去SUMO标签以及分子筛凝胶过滤层析进行纯化。并通过Bio-dot Western blot和间接ELISA方法检测了该纳米抗体与PCV2b/2d-Cap蛋白的结合能力。结果显示，构建的重组质粒测序正确；经纯化得到的纳米抗体蛋白约为14 kDa;间接ELISA证实该纳米抗体对PCV2b/2d-Cap蛋白检测下限均为0.68 mg/L。结果表明，该纳米抗体与PCV2b和PCV2d亚型Cap蛋白均具有交叉反应，为PCV2b/2d亚型的临床检测建立新型诊断方法奠定了基础。