兔源强毒力金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种快速、特异性强且敏感性高的兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测方法，本试验根据金黄色葡萄球菌pvl基因的保守序列设计了特异性的引物和探针，通过反应条件的优化，建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测方法。结果显示，该方法耗时短，仅需约50 min就能完成检测，较已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法均省时；该方法特异性强，对兔源低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、魏氏梭菌、大肠杆菌和阴性对照(灭菌ddH₂O)均无交叉反应；该方法敏感性高，最低检测限为10拷贝/μL,分别是已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的1 000倍和10倍。此外，该方法重复性好，批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。应用该方法检测126份已知结果的临床样品，检测结果与已知结果、已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的检测结果完全一致。该方法的建立不仅丰富了兔源强毒力金黄色葡萄球菌的检测方法，也为该菌的快速检测提供了更有力的技术支持。