| 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立 |
| |
| 引用本文： | 赵素君,谢晶,曹冶,李江凌,王秋实,叶勇刚,罗丹丹,叶健强,廖党金.肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立[J].中国草食动物,2012(4):50-53. |
| |
| 作者姓名： | 赵素君 谢晶 曹冶 李江凌 王秋实 叶勇刚 罗丹丹 叶健强 廖党金 |
| |
| 作者单位： | 四川省畜牧科学研究院 |
| |
| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目(2006BAD04A17、2012BAD12B03);四川省科技支撑计划项目(2010NZ0106);国家奶牛产业技术体系岗位科学家项目;四川省生猪现代产业体系项目 |
| |
| 摘 要： | 肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。
|
| 关 键 词： | 肠出血性大肠杆菌 rfbE基因 EMA-PCR 死细菌 活细菌 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
