Ⅰ亚群禽腺病毒通用PCR检测方法的建立及应用 |
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引用本文: | 肖跃强,于雪,刘吉山,杨慧,苗立中,徐晴晴,何诚,沈志强.Ⅰ亚群禽腺病毒通用PCR检测方法的建立及应用[J].中国预防兽医学报,2018(3). |
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作者姓名: | 肖跃强 于雪 刘吉山 杨慧 苗立中 徐晴晴 何诚 沈志强 |
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作者单位: | 山东省滨州畜牧兽医研究院;中英禽病国际研究中心;山东绿都生物科技有限公司 |
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摘 要: | 为建立快速、特异、敏感的Ⅰ亚群禽腺病毒(FADV-Ⅰ)临床通用PCR检测方法,本研究根据Gen Bank登录的FADV-Ⅰ不同血清型基因组序列,比对分析后选择病毒DNA聚合酶基因设计通用检测引物,优化PCR体系各反应条件,确定该方法的敏感性与特异性,建立了检测FADV-Ⅰ通用PCR方法,并将其进行了临床应用与感染SPF鸡脏器组织病毒分布检测比较。结果显示,经优化确定引物浓度为1.0μM,退火温度为50.4℃~61.0℃,该方法能够特异性扩增该亚群病毒494 bp的DNA聚合酶基因,对产蛋下降综合征病毒、马立克病毒、鸡痘病毒等扩增结果均为阴性,特异性强;该方法的检测限为2.8×102拷贝/μL病毒PCR产物标准品;对临床病例经PCR检测、病毒血清型鉴定与分离结果显示,该方法与病毒分离方法符合率达100%,且检测的病毒被鉴定为4、8a、8b和11血清型FADV;对病毒感染鸡脏器组织检测结果显示,该方法对其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃与肌肉样品均可以检测到该病毒,较文献报道方法更敏感。以上结果表明本研究建立的PCR检测方法具有通用、特异、敏感、快速、准确等特点,能够用于FADV-Ⅰ的临床检测,为防控该亚群FADV引发的疫病提供了技术保障。
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