| 花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 马艳平,覃宝田,梁 曦,王 刚,郝 乐,周东来,刘振兴.花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增检测方法的建立[J].广东农业科学,2024,51(3):148-156. |
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| 作者姓名： | 马艳平 覃宝田 梁 曦 王 刚 郝 乐 周东来 刘振兴 |
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| 作者单位： | 1. 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室;2. 汕尾市农业科学院;3. 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金（2021A1515010498）； |
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| 摘 要： | 【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全，无特效防控药物，早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法，可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)，针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板，对反应体系中的引物浓度比，Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO4、dNTP浓度，以及反应温度和反应时间进行优化；结合一次性核酸试纸条，建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L，引物F3和B3均为0.4μmol/L，探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL；最佳反应...
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| 关 键 词： | 花鲈虹彩病毒 交叉引物恒温扩增 特异性 灵敏度 核酸试纸条 可视化 |
Establishment of a Cross Priming Amplification Detection Method of Lateolabrax maculatus Iridovirus |
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| MA Yanping,QIN Baotian,LIANG Xi,WANG Gang,HAO Le,ZHOU Donglai,LIU Zhenxing.Establishment of a Cross Priming Amplification Detection Method of Lateolabrax maculatus Iridovirus[J].Guangdong Agricultural Sciences,2024,51(3):148-156. |
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| Authors: | MA Yanping QIN Baotian LIANG Xi WANG Gang HAO Le ZHOU Donglai LIU Zhenxing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lateolabrax maculatus iridovirus cross priming amplification specificity sensitivity nucleic acid strip visualization |
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