| 家蚕孵化酶样基因BmHEL的原核表达及蛋白纯化与功能鉴定 |
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| 引用本文： | 唐顺明,卢福浩,沈兴家,王娜,丁丽平,赵巧玲,张国政,郭锡杰. 家蚕孵化酶样基因BmHEL的原核表达及蛋白纯化与功能鉴定[J]. 蚕业科学, 2010, 36(3): 407-412. DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2010.03.005 |
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| 作者姓名： | 唐顺明 卢福浩 沈兴家 王娜 丁丽平 赵巧玲 张国政 郭锡杰 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院蚕业研究所,农业部蚕桑遗传改良重点开放实验室,江苏镇江212018;江苏科技大学,江苏镇江212003;江苏科技大学,江苏镇江,212003 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划"973"项目，国家高技术研究发展计划"863"项目，江苏省高校自然科学基金 |
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| 摘 要： | 孵化酶(hatchingenzyme,HE)是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。在已完成全长967bp的家蚕孵化酶样基因(BmHEL)克隆及其转录特性分析的基础上,研究了该基因在原核表达系统的表达、产物纯化及其对家蚕卵壳的降解功能。以全长BmHEL质粒DNA为模板,用PCR方法分别获得了该基因的开放阅读框(BmHELORF,885bp)、缺失信号肽编码区(BmHELa,834bp)和推测成熟酶功能编码区(BmHELb,624bp)的3个片段,并亚克隆入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行表达。表达的3种外源蛋白均以包涵体形式存在,获得含有6×His-Tag标签的融合蛋白,其分子质量分别为33.4、31.8、24.0kD。通过Westernblot方法检测到了用Ni-NTA亲和层析柱纯化的目的蛋白。纯化复性后的3种孵化酶对家蚕卵壳底物有一定降解活性,其中BmHELORF的活性最高,BmHELb的活性最低。在pH7.1反应条件下3种酶的活性比pH9.5时高。研究结果在蛋白质水平上进一步证实家蚕孵化酶样蛋白参与了蚕卵孵化这一重要生命过程。
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| 关 键 词： | 家蚕 孵化酶样基因 原核表达 蛋白纯化 卵壳底物 降解 |
Prokaryotic Expression, Protein Purification and Biological Function Identification of BmHEL Gene from Bombyx mori |
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| TANG Shun-Ming,LU Fu-Hao,SHEN Xing-Jia,WANG Na,DING Li-Ping,ZHAO Qiao-Ling,ZHANG Guo-Zheng,GUO Xi-Jie. Prokaryotic Expression, Protein Purification and Biological Function Identification of BmHEL Gene from Bombyx mori[J]. Acta Sericologica Sinica, 2010, 36(3): 407-412. DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2010.03.005 |
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| Authors: | TANG Shun-Ming LU Fu-Hao SHEN Xing-Jia WANG Na DING Li-Ping ZHAO Qiao-Ling ZHANG Guo-Zheng GUO Xi-Jie |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bombyx mori Hatching enzyme-like gene Prokaryotic expression Protein purification Eggshell substrate Degradation |
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