| 摘 要： | 利用生物信息学方法分析牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E~(rns)蛋白,筛选出优势B淋巴细胞(简称B细胞)和T淋巴细胞(简称T细胞)表位组装成多表位蛋白,并在大肠埃希菌中进行表达和验证。首先从NCBI GenBank数据库获得E~(rns)蛋白的氨基酸序列,将所得到的序列进行理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位、磷酸化、酰基化位点分析,预测二级结构及二硫键的位置,使用4种B细胞和2种T细胞软件预测其抗原表位,将预测的表位进行筛选并组装成多表位疫苗,进行密码子优化确保其在大肠埃希菌中高效表达,最后进行蛋白的纯化和Western blot验证。结果显示,E~(rns)蛋白由227个氨基酸残基组成,分子质量约为26 ku,理论等电点8.62,化学式为C_(1131)H_(1768)N_(326)O_(335)S_(14),不稳定系数为29.98,亲水性平均值(GRAVY)和脂肪指数分别-0.529和71.37,在大肠埃希菌体内半衰期大于10 h,不具有跨膜结构域,主要定位在细胞质中,有21个翻译后修饰(PTM)位点;在E~(rns)蛋白的二级结构中,α螺旋占约36.12%,β折叠占约18.06%,β转角占约7.93%,无规卷曲占约37.89%,而且具有4个二硫键。将筛选出的5个B细胞和6个T细胞优势表位用柔性linker组装成多表位疫苗,Western blot结果显示多表位蛋白对BVDV阳性血清具有良好的反应原性,为牛病毒性腹泻病毒E~(rns)多表位蛋白后续的研究奠定了基础。
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