| 采用IMS-RT-PCR方法快速检测肉制品中大肠杆菌O157 |
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| 引用本文： | 龙梦瑶,蒋蔚,陈永军,熊挺,陈芸,韩阳瑞,凌娇,孙卫东,王权. 采用IMS-RT-PCR方法快速检测肉制品中大肠杆菌O157[J]. 畜牧与兽医, 2018, 0(3): 68-76 |
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| 作者姓名： | 龙梦瑶 蒋蔚 陈永军 熊挺 陈芸 韩阳瑞 凌娇 孙卫东 王权 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所; |
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| 摘 要： | ![]()
建立免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)与实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR)技术相结合快速检测肉制品中肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157的方法。利用改良热酚-水法提取EHEC O157的O-特异性多糖(O-specific polysaccharides,O-SP)作为筛选抗原,制备抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体。将PM 3-50纳米磁珠经3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化后,与抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体结合,得到偶联量为150μg/mg的免疫磁珠。免疫磁珠的最高捕获量为13748.33 CFU/0.2 mg,在肉制品中特异性捕获的最低检测限为2.2 CFU/m L。根据EHEC 0157血清型的特异性基因rfb E(Gen Bank登录号:S83460)设计引物和荧光探针,将IMS与RT-PCR相结合进行检测EHEC O157。当肉制品中EHEC O157含量≥1 CFU/g(2.5 g样本),免疫磁珠能捕获,并通过EC肉汤培养基增殖3h后,RT-PCR即可成功检测,全程只需6-7 h。IMS-RT-PCR相结合的检测方法,在大大缩短了检测时间的基础上,再次降低了EHEC O157的检测限,在防范肉制品源性致病性EHEC O157传染方面具有重要意义。
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| 关 键 词： | 免疫磁珠分离法(IMS) 荧光定量PCR(RT-PCR) 肉制品 肠出血性大肠杆菌O157 O-特异性多糖(O-SP) |
Rapid detection of Escherichia coli O157 in meat products by immunomagnetic beads and real-time PCR |
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| Abstract: | ![]()
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